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活体动物体内光学成像主时势受生物发光与荧光两种技艺。生物发光是荧光素酶基因(Luciferase) 象征细胞或DNA,荧光技艺则罗致绿色荧光卵白、红色荧光卵白等荧光诠释基因和FITC、Cy5、 Cy7等荧光素及量子点(quantumdot, QD)进行象征。一 技艺简介 —— 象征旨趣——哺乳动物生物发光,一般是将Firefly luciferase基因(由554个氨基酸组成,约50KD)即荧光素酶基因整合到预期不雅察的细胞染色体DNA上以抒发荧光素酶,培养出能巩固抒发荧光素酶的细胞株,当细胞辞别、周折、分化时, 荧光素酶也会获得合手续巩固的抒发。基因、细胞和活体动物齐可被荧光素酶基因象征。将象征好的细胞接种到施行动物体内后,当外源(腹腔或静脉打针)给以其底物荧光素(luciferin),即可在几分钟内产生发光步地。这种酶在ATP,氧存在的条目下,催化荧光素的氧化反馈才不错发光,因此惟有在活细胞内才会产生发光步地,况兼发光光强度与象征细胞的数量线性运筹帷幄。 除Firefly Luciferase外,无意也会用到Renilla Luciferase。二者的底物不相通,前者的底物是荧光素(D-luciferin),后者的底物是coelentarizine。二者的发光波长不相通,前者所发的光波长在540~600nm,后者所发的光波长在460~540nm操纵。前者所发的光更容易透过组织王竹子 露出,后者在体内的代谢比前者快,而且特异性莫得前者好,是以大部分活体施行使用Firefly Luciferase手脚诠释基因,若是需要双象征,也可罗致后者手脚备选决策。 荧光素酶的发光是生物发光,不需要激励光,但需要底物荧光素。荧光素在氧气、ATP存在的条目下和荧光素酶发生反馈王竹子 露出,生成氧化荧光素(oxyluciferin),并产生发光步地。